名词解释题Sanger双脱氧链末端终止法

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Sanger双脱氧链末端终止法

参考答案和解析

正确答案：是检测DNA序列的一种方法。其原理是利用PCR，但反应体系中除了dNTP外，还有ddNTP。ddNTP可掺入到正在延伸的DNA链中，但不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。

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第1题：

Sanger双脱氧终止法对DNA测序时,下列哪种核苷酸的加入会使DNA链延长终止()

A、dGTP

B、dTTP

C、dCTP

D、Datp

参考答案：C

第2题：

Sanger双脱氧链末端终止法和Maxam-Gilbert化学降解法的共同点包括（）。

A、反应体系中均有ddNTP
B、都是根据在某一固定的点开始核苷酸链的延伸，随机在某一个特定的碱基处终止
C、均产生A、T、C、G四组不同长度的一系列核苷酸链
D、均在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳进行片段的分离和检测
E、均可检测DNA的一级结构

正确答案:B,C,D,E

第3题：

Sanger法测序的待测模板包括

A、单链DNA

B、双链DNA

C、单链RNA

D、双链RNA

E、任意核酸

参考答案：AB

第4题：

SANGER双脱氧链终止法的原理是什么？

正确答案: DNA链中核苷酸以3’，5’-磷酸二酯键连接，合成DNA所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸。2’，3’ddNTP与普通dNTP不同，它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中，但由于没有3’羟基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP，链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争，产物是一系列的核苷酸链，其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离。在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP，结果将产生4组寡核苷酸，它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置。

第5题：

蛋白质自动测序仪的工作原理为（）。

A、Edman降解法
B、MaxamGilbert化学降解法
C、双脱氧链末端终止法
D、光电比色法
E、分光光度法

正确答案:A

第6题：

酶标仪的工作原理为( )。

A.Edman降解法

B.Maxam Gilbert化学降解法

C.双脱氧链末端终止法

D.光电比色法

E.分光光度法

参考答案：E

第7题：

Sanger双脱氧链终止法采用DNA引物引导新生DNA的合成，采用的模板是（）

A、单链DNA
B、双链DNA
C、单链RNA
D、双链RNA
E、蛋白质

正确答案:A,B

第8题：

DNA测序技术中的链末端终止法又称为

A、经典法

B、传统法

C、酶法

D、Sanger法

E、自显影法

参考答案：CD

第9题：

简述利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原理与方法？

正确答案: 原理是采用核苷酸链终止剂—2，，3，-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH，一旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP，结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入dNTP，使DNA链仍可继续延长，直至参入下一个ddNTP。根据这一方法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。
方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。

第10题：

简述Sanger双脱氧链终止法的基本原理。（聚丙烯酰胺凝胶电泳模式图）

正确答案: （1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5’端到3’端聚合（DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程。）；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3’-OH末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3’羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段，通过比较所以的DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。

Sanger双脱氧链末端终止法

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