判断题碱法和煮沸法分离质粒 DNA的原理是不相同的。A 对B 错

题目

判断题

碱法和煮沸法分离质粒 DNA的原理是不相同的。

对

错

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第1题：

写出碱提酸沉法加工大豆分离蛋白的原理和工艺流程。

正确答案: （1）原理：碱提酸沉法是利用蛋白质在碱性环境中的溶解度较大的特点，先把蛋白质和水溶性非蛋白成分与不溶性成分分离后，再用酸沉淀法分离蛋白质。
（2）工艺流程：低变性脱脂豆粕--→粉碎--→碱液浸泡提取--→离心分离--→二次碱提--→离心分离--→滤液酸沉--→离心分离--→水洗--→中和--→灭菌--→喷雾干燥--→分离蛋白。

第2题：

假设你从细菌B（非大肠杆菌）中分离到一个质粒，命名为pBX，大小约8kb，DNA序列未知。请你设计实验，克隆和鉴定该质粒的复制原点（replication origin，ori）。

正确答案: 将pBX质粒经过适当酶切，克隆到一个克隆载体（E.coli的质粒，携带某抗生素R的抗性基因）中，转化E.coli建立一个该质粒的小文库，再电转化到细菌B中，涂含R的培养基平板，阳性克隆（可以在该质粒宿主B中复制）进行测序，可初步获得该质粒的ori序列，然后进一步精确定位（外切酶酶切逐步缩短，再转化验证）。——重组质粒转化法。

第3题：

关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确 ( )

A、溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体

B、溶液Ⅱ的作用是使DNA变性

C、溶液Ⅲ的作用是使DNA复性

D、质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性

E、该方法简单，重复性好，在实验中经常使用

参考答案：A

第4题：

碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。

正确答案: 碱裂解法原理：在碱性条件下，双连DNA氢键断裂，结构破坏变性，环状超螺旋质粒不充分变性。在中性条件下变性质粒恢复原来构型，而线性大分子细菌DNA不能复性呈不溶物而经离心除去。
（各种可能因素是上一届的，具体其实大家可以根据那天师兄说的去写）
提取失败：
1）洗去双链时，将质粒DNA洗去；
2）破壁失败，质粒没析出；
3）加剂问题
电泳失败：1）电压太高
2）没加染色剂
3）胶穿孔
4）电泳时间过长

第5题：

可以用煮沸法来快速提取细菌的DNA进行PCR检测。（）

正确答案:正确

第6题：

从细菌中分离质粒DNA的方法都包括的基本步骤是（）。

A、培养细菌检测质粒
B、培养细菌使质粒扩增
C、收集和裂解细胞
D、分离和纯化质粒DNA
E、B+C+D

正确答案:E

第7题：

中药化学成分的分离方法及原理众多，其中，碱提酸沉法主要用于分离（）。

A、甾体
B、黄酮
C、生物碱
D、多糖类
E、挥发油

正确答案:B

第8题：

下列对细菌质粒生物学特性叙述正确的是

A:质粒DNA复制为自主复制
B:质粒DNA复制为非自主复制
C:质粒是细菌生命活动不可缺少的物质
D:细菌内结构相似的质粒都能稳定共存
E:质粒DNA不能复制

答案：A

解析：

第9题：

简述质粒DNA的分离提取方法。

正确答案: （1）选择性抽提法，（2）碱性SDS法

第10题：

小批量碱变性提取质粒DNA的原理与基本过程如何？

正确答案: 碱变性法是常用的质粒抽提方法，其原理是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
小批量碱变性提取质粒DNA的基本过程为——
（1）酶或机械法等方法破坏细胞，释放出胞内物质；
（2）加碱使DNA与蛋白质变性，加中和液复性。因为质粒DNA分子量小易复性，从而使得其与基因组DNA分离；
（3）在上清液中通过酚－氯仿抽提、去垢剂或酶使剩余蛋白质变性或水解，除去蛋白质；
（4）再加入醇溶液使质粒DNA变性沉淀而与其他水溶性物质分离；
（5）将沉淀溶解于有RNase的TE溶液中，温育降解RNA后电泳检测、-20℃保存。

碱法和煮沸法分离质粒 DNA的原理是不相同的。

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