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微生物常用的分离、纯化方法有哪些？

题目

微生物常用的分离、纯化方法有哪些？

参考答案和解析
正确答案: 常用的分离、纯化方法：
①单细胞挑取法；
②稀释涂布平板法 ；
③稀释混合平板法；
④平板划线法。
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第1题：

分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有哪些？它们的原理是什么？


正确答案: 分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有：离子交换色谱，疏水色谱，亲和色谱和凝胶过滤色谱；
离子交换色谱，以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子和交换剂上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法；
疏水色谱，利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异对蛋白质组分进行分离的色谱方法；
亲和色谱：利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质；
凝胶过滤色谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方法。

第2题：

微生物菌种的分离和纯化可以用的方法有（）、（）。


正确答案:平板划线法；稀释后涂布平板法

第3题：

分离纯化蛋白质的意义有哪些？


正确答案:
研究蛋白质的结构与功能：要求纯度高，不变性；
提取活性的酶或蛋白质：必须保持天然活性状态；
作为药物或食品添加剂：纯度要求一般。
一般步骤：材料的选择—原料的预处理—蛋白质的提取—从抽提液中沉淀蛋白质—纯化—蛋白质的结晶。超二级结构：又称模体，是指二级结构单元进一步聚集和组合在一起，形成规则的二级结构聚集体。其形成进一步降低了蛋白质分子的内能，使其更加稳定，它是蛋白质在二级结构基础上形成三级结构时经过的一个新的结构层次。

第4题：

酶提取和分离纯化的方法有哪些？


正确答案: （一）根据酶分子溶解度不同的方法
（1）盐析沉淀法
（2）等电点沉淀法
（3）有机溶剂沉淀法
（二）根据酶分子大小和形状不同的方法
（1）离心分离法
（2）体积排阻法
（3）超滤
（三）根据酶分子电荷性质的方法
（1）离子交换层析
（2）等电聚焦电泳
（四）根据酶分子专一性结合的分离方法
（1）亲和层析

第5题：

在物质的分离纯化中，和其它方法相比，色谱法基本特点有哪些？


正确答案: 色谱学是一门以物理化学为基础的分离与纯化科学，与其他分离纯化法相比，它具有以下几个基本特点。
1）分离效率高色谱分离的效率之高是其他分离技术所无法相比的，尤其是细颗粒多孔球型的高效填料问世后，使色谱柱的柱效有更大的提高。每米可达几十万的理论塔板数。
2）应用范围广HPLC的应用范围之广也是其他分离技术无法相比的，从极性到非极性，离子型到非离子型，小分子到大分子，无机到有机及生物活性物质，以及其他热稳定性或热不稳定性的化合物，可以说无所不包。尤其是对生物样品的分离分析，是其他方法无法代替的。
3）操作参数多色谱的可变操作参数之多也是其他分离技术无法相比的。流动相可用气体、液体或超临界流体。在气、液、流体中又有许多不同的物质可选用。固定相可用液、固两大类。在加上流动相的pH值、离子强度、有机溶剂的含量、分离温度等参数的变化，使整个分离过程随着上述各种参数的变化适应于各种不同的样品分离的需要，应用于各种困难复杂的场合。
4）高灵敏度在线检测与其他分离手段相比，色谱具有高灵敏度在线检测的特性。根据不同的物理与化学的原理，HPLC具有不同的高灵敏度的检测器，适用于多种千差万别样品的需要。这些检测器不但稳定性好，信噪比高，同时都能进行连续的在线检测，及时掌握分离与纯化过程中的情况，保证在要求的纯度下得到最高的产率。
5）快速分离HPLC由于采用了高压溶剂传输系统，即使采用高效细颗粒填料，也能保证分离过程在一定的线速下进行，而且由于单位柱长的柱效提高，柱长可以大大缩短，更加快了分离的速度，从而可以提高单位时间的产量。
6）连续自动化操作电脑用于色谱分离过程以后，从最初的简单数据处理发展到目前作为控制操作的中心，使大量的样品可以按照事先设置好的程序进行完全自动连续的操作。
色谱法正是由于上述这些特点，在生物技术蓬勃发展、迫切需要有效的分离纯化方法的今天，人们还是认为色谱是最理想的也是最有发展前景的一种分离与纯化生物大分子的方法。

第6题：

微生物分离的常用方法统称为（）。


正确答案:稀释分离法

第7题：

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？


正确答案: 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。

第8题：

常用的蛋白质分离纯化方法有（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）等。


正确答案:离心；透析；沉淀；层析；电泳；蛋白印迹；蛋白质芯片；质谱法

第9题：

常用的微生物分离纯化方法有哪些？这些方法各有什么优缺？


正确答案: 常用的微生物分离纯化方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用，不需要特殊的仪器设备，分离纯化效果好稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间，缺乏溶氧而生长受影响，形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高，易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固，不能充分混匀。在微生物学研究中，更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。另一种简单快速有效的涂布平板法，为玻璃涂棒连续涂布分离法。平板划线分离法的特点是简便快速，但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的，需再重复划线1～2次，并结合显微镜检测个体形态特征，才可获得真正的纯培养物。

第10题：

分离纯化酶有哪些常用方法，根据是什么？


正确答案: 酶的分离纯化工作主要是，将酶从杂蛋白中分离出来或者将杂蛋白从酶溶液中除去。现有的酶分离纯化方法都是依据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的。
1、根据分子大小而设计的方法，如离心分离法、筛膜分离法、凝胶过滤法等。
2、根据溶解度的大小分离的方法，如盐析法，有机溶剂沉淀法，共沉淀法，选择性沉淀法，等电点沉淀法。
3、按分子所带正负电荷的多少分离的方法，如离子交换分离法，电泳分离法，聚焦层析法等。
4、按稳定性差异建立的分离方法，如选择性热变性法，选择性酸碱变性法，选择性表面变性法等。
5、按亲和作用的差异建立的分离方法，如亲和层析法，亲和电泳法。
5.酶分子修饰的方法及意义
通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。
酶分子的修饰方法分为化学法、生物法和物理法。化学法又可分为金属离子置换法、肽链有限水解法、蛋白质侧链基团的小分子修饰法等。生物法是通过基因工程的手段改变蛋白质，即基于核酸水平对蛋白质进行改造，利用基因操作技术对DNA或mRNA进行改造和修饰，以期获得化学结构更为合理的蛋白质。物理法的特点是不改变酶的组成和基团，酶分子的共价键不发生变化。

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