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常见蛋白质分离纯化的方法有哪些？

题目

常见蛋白质分离纯化的方法有哪些？

参考答案和解析
正确答案:按照分子大小：透析、超过滤、密度梯度离心、凝胶过滤
按照溶解度差别：等电点沉淀法、盐析、有机溶剂沉淀
按照电荷不同分：电泳、离子交换
蛋白质选择吸附分：结晶磷酸钙
配体特异性分：亲和层析
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第1题：

常用的蛋白质分离纯化方法有（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）等。


正确答案:离心；透析；沉淀；层析；电泳；蛋白印迹；蛋白质芯片；质谱法

第2题：

请以DEAE-C为例说明离子交换纤维素分离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理。


正确答案:无论是升高环境的pH还是降低pH或是增加离子强度都能将被吸附物质洗脱下来。
（1）、升高环境的pH，使DEAE-C在此pH下不解离，从而不能吸附蛋白质而被洗脱下来。
（2）、降低环境的pH，使蛋白质在此pH下失去电荷，从而丧失与DEAE-C结合力而被洗脱下来。
（3）、用高浓度的同性离子根据质量作用定律将目的物离子取代下来。

第3题：

主要用于蛋白质分离纯化的方法是（ ）


正确答案：A

第4题：

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？


正确答案: 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。

第5题：

以生物组织为原料提取纯化多肽和蛋白质，在选择分离纯化方法时应注意哪些问题？


正确答案:（1）根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质；
（2）根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质；
（3）根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋白质；
（4）根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质；
（5）根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质；
（6）根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质；
（7）根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质；
（8）根据蛋白质选择性吸附性质来纯化蛋白质；
（9）根据蛋白质的某些特殊性质进行纯化。

第6题：

分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有哪些？它们的原理是什么？


正确答案: 分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有：离子交换色谱，疏水色谱，亲和色谱和凝胶过滤色谱；
离子交换色谱，以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子和交换剂上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法；
疏水色谱，利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异对蛋白质组分进行分离的色谱方法；
亲和色谱：利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质；
凝胶过滤色谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方法。

第7题：

比较蛋白质的分离纯化技术中凝胶过滤和超过滤方法的原理。


正确答案:凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术，但是其原理和操作都不相同。凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小将样品中的各种蛋白质分子分开，具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的凝胶过滤柱，小分子的蛋白质进入凝胶孔内，大分子的蛋白质留在外面，然后用洗脱液洗脱，蛋白质依分子大小被洗脱，然后是小分子的蛋白质。超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质，具体操作是将样品装入透析袋，然后利用高压或离心力，迫使蛋白质样品中的非蛋白的小.分子溶质通过半透膜，蛋白质留在透析袋内。

第8题：

分离纯化蛋白质的意义有哪些？


正确答案:
研究蛋白质的结构与功能：要求纯度高，不变性；
提取活性的酶或蛋白质：必须保持天然活性状态；
作为药物或食品添加剂：纯度要求一般。
一般步骤：材料的选择—原料的预处理—蛋白质的提取—从抽提液中沉淀蛋白质—纯化—蛋白质的结晶。超二级结构：又称模体，是指二级结构单元进一步聚集和组合在一起，形成规则的二级结构聚集体。其形成进一步降低了蛋白质分子的内能，使其更加稳定，它是蛋白质在二级结构基础上形成三级结构时经过的一个新的结构层次。

第9题：

试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。


正确答案: 串联亲和纯化（TAP），用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用，通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤：
（1）蛋白质标记：由蛋白A的IgG结合区（ProtA）和钙调蛋白结合区（CBP）构成，中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开；
（2）构建表达标记蛋白的细胞或组织：将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位；
（3）细胞抽提物的准备；
（4）串联亲和纯化；
（5）蛋白质复合体的鉴定。

第10题：

简述蛋白质类药物的分离纯化方法？


正确答案: ①沉淀法
②按分子大小分离的方法
③按分子所带电荷进行分离的方法
④亲和层析法

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