Ames实验原理，常用菌株及其鉴定方法？

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第1题：

Ames试验菌株鉴定的内容是什么？

正确答案: 用于Ames试验的菌株必须进行基因型、自发回复突变数、对鉴别性诱变剂的反应三个方面的鉴定。其中，基因型鉴定还包括组氨酸营养缺陷型、深粗糙型（rfA.、uvrB缺失、R因子和pAQl质粒等方面的鉴定。

第2题：

毒理学实验中，Ames试验的指示菌株是（）。

A、鼠伤寒沙门菌的野生型菌株
B、鼠伤寒沙门菌的色氨酸突变型菌株
C、鼠伤寒沙门菌的组氨酸突变型菌株
D、大肠杆菌的野生型菌株
E、大肠杆菌的色氨酸突变型菌株

正确答案:C

第3题：

Ames试验常用的实验菌株是( )

A.鼠伤寒沙门菌

B.大肠埃希菌

C.铜绿假单胞菌

D.结核杆菌

E.真菌

正确答案：A

第4题：

试述Ames试验的原理。

正确答案:B．N．Ames等经十余年努力，于1975年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验，亦称Ames试验。该法比较快速、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物，反映多种污染物的综合效应。Ames试验的原理是：鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his－）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶，可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。鉴于化学物质的致突变作用与致癌作用之间密切相关，故此法现广泛应用于致癌物的筛选。

第5题：

简述Ames实验原理。

正确答案: 第二阶段：遗传毒性试验、传统致畸试验和短期喂养试验。遗传毒性检验的首要目的是确定被检化学物质诱导受试物发生突变的可能性。以致突变试验来定性表明受试物是否有突变作用或潜在的致癌作用。致突变试验一般首选鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验，即Ames试验。
鼠伤寒沙门氏菌的突变型（即组氨酸缺陷型）菌株在无组氨酸的培养基上不能生长，在有组氨酸的培养基上可以正常生长。但如在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时，则沙门氏菌突变型可回复突变为野生型（表现型），因而在无组氨酸培养基上也能生长，故可根据菌落形成数量，检查受试物是否为致突变物。

第6题：

Ames试验菌株鉴定实验包括哪些内容？

正确答案: （1）基因型鉴定
①组氨酸营养缺陷鉴定（组氨酸需求试验）
组氨醛营养缺陷型菌株只能在补充有组氨酸的培养基上生长，而在无组氨酸的培养基上则不能生长。
②深租糙型（rfa）鉴定（结晶紫抑菌试验）
深租糙型突变的细菌，缺乏脂多搪屏障，因此，一些大分子物质能进入菌体。结晶紫大分子可进入菌体并杀死细菌。
③uvrB缺失的鉴定（紫外线敏感试验）
UvrB缺失，即切除修复系统缺失。
④R因子的鉴定
带有R因子的菌株具有抗氨苄青霉素的特性，据此以鉴别R因子之存在。菌株TA102含PAQ1质粒（含抗四环素因子），因此还应做四环素抗性试验。
（2）自发回变数测定
受试菌株在保存或培养过程中，能产生自发回变。不同菌株的自发回变数有一定范围。
（3）对鉴别性致突变物的反应
试验菌株对不同致突变物的反应不同，应该在有和没有代谢活化的条件下鉴定各试验菌株对致突变物的反应。

第7题：

Ames试验常用的实验菌株是（）。

A、鼠伤寒沙门菌
B、大肠埃希菌
C、铜绿假单胞菌
D、结核杆菌
E、真菌

正确答案:A

第8题：

Ames试验最常用的实验方法是

A、共培养法

B、预培养法

C、平板掺入法

D、点试法

E、突变法

参考答案：C

第9题：

简述常用目的基因制备的方法及其原理？

正确答案:生物学方法；化学合成法；基因文库法；利用PCR扩增法。
原理：
①生物学方法是采用基因工程手段把染色体DNA用限制内切酶切割，将所有片段都连接到某种载体上，转入大肠杆菌中增殖，再用适当方法来筛选含该基因的重组体菌落，从重组题细菌提取DNA，经酶切后得到目的基因。
②化学合成法是以单核苷酸为原料，在体外用化学方法按照已知基因的碱基序列，先合成DNA短片段，再依次连接而成完整的目的基因链。
③基因文库法是将某种生物全部基因组的遗传信息，贮存在可以长期保存的稳定重组体中，以备需要时能够随时应用它分离所需要的目的基因。
④利用PCR扩增法是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下，利用DNA聚合酶催化合成反应，体外扩增特异DNA片段。

第10题：

ONPG试验主要用于（）。

A、迟缓发酵木糖菌株的快速鉴定
B、迟缓发酵蔗糖菌株的快速鉴定
C、迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定
D、快速发酵木糖菌株的鉴定
E、快速发酵乳糖菌株的鉴定

正确答案:C

Ames实验原理，常用菌株及其鉴定方法？

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