简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。

题目

简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。

参考答案和解析
正确答案: 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法,是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术,为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤:
(1)蛋白样品的制备;
(2)经过SDS-PAGE分离样品;
(3)分离的蛋白转移到膜载体上,转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附;
(4)用固定在膜上的蛋白质作为抗原,与对应的非标记抗体(一抗)结合;
(5)洗去未结合的一抗,加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗,通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。
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相似问题和答案

第1题:

试论述沉淀重量法的基本操作步骤,并举例硫酸钡重量法测硫的基本原理。


正确答案:试样分解(加沉淀剂或脱水)——沉淀 (放置保温)——陈化——过滤——洗涤——烘干灼烧——称重——计算百分含量。BaSO4重量法测S:试样用硝酸、溴水分解以高氧酸冒烟,试液过滤,滤液用色层分离干扰元素后加入氯化钡沉淀剂,生成硫酸钡沉淀经保温陈化,过滤洗涤,沉淀及滤纸炭化、灰化再高温灼烧,称出硫酸钡重量,计算硫的百分含量。

第2题:

简述市场法操作步骤?


参考答案:操作步骤:(1)踏勘被估房地产(2)收集较充分的房地产交易实例资料(3)选取可供比较参照的交易实例(4)建立价格可比基础(5)被估房地产与交易实例之间差异因素的比较和修正(6)被估房地产价值的确定

第3题:

目前临床上检测抗核抗体主要采用

A、ELISA

B、直接免疫荧光法

C、间接免疫荧光法

D、放射免疫法

E、免疫印迹法


参考答案:C

第4题:

简述薄层色谱法的主要操作步骤是什么?


正确答案: (1)薄层板的制备
(2)点样
(3)展开
(4)显色与检视
(5)记录

第5题:

简述免疫印迹法的原理。


正确答案: 免疫印迹法亦称为Westemblot,由SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷,SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动,分子量小者,泳动速度快;然后将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上;最后将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用,加λ能形成不溶性显色物的酶反应底物,使区带染色;根据电泳时加λ的分子量标准,可确定各组分的分子量。

第6题:

用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的分析技术是

A.免疫渗滤试验

B.免疫印迹法

C.斑点酶免疫吸附试验

D.酶联免疫斑点试验

E.免疫层析试验


正确答案:E

第7题:

目前免疫细胞的检测方法主要是

A、免疫荧光法

B、放射免疫法

C、免疫细胞化学法

D、流式细胞术

E、免疫印迹法


参考答案:D

第8题:

用来鉴定蛋白质的技术是

A.亲和层析

B.离子交换层析

C.NORTHEM印迹法

D.SOUTHERN印迹法

E.WESTERN印迹法


正确答案:E
Southern印迹杂交是DNA经电泳分离后转移至纤维膜上与探针杂交。N011herm印迹杂交则是电泳分离RNA后转至纤维膜上与探针杂交。Western印迹法是蛋白质在SDS—PAGE电泳后被转移至膜上后进行抗原抗体反应。

第9题:

简述断法的操作要领和步骤。


正确答案: 1、断法的操作要领,关键在于运刀的“翻”“转”。
2、所谓“翻”,就是正腕入刀,使左刀尖平着插入趾甲左下角,然后翻转刀刃,使刀尖将甲角挑起,开始入刀。
3、所谓“转”,就是在走刀过程中,用拇指和食指的推力,从右向左,转着进刀,一直到左端切断为止,在转着进刀时,不能偏离“青线”,同时,左手持脚拇指要配合动作,随刀转走。

第10题:

酶联免疫吸附实验常用的方法有()。

  • A、直接法、间接法、夹心法、竞争抑制法
  • B、直接法、沉淀法、印迹法、竞争抑制法
  • C、直接法、间接法、夹心法、免疫扩散法
  • D、直接法、间接法、印迹法、免疫扩散法
  • E、直接法、沉淀法、印迹法、免疫抑制法

正确答案:A