简述降落PCR。

题目

简述降落PCR。

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相似问题和答案

第1题：

简述PCR原理及其基本反应步骤。

正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA链。

第2题：

简述PCR的原理及其应用。

正确答案:PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5（→3（方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。

第3题：

简述真空降落的原因？

正确答案: （1）汽封给汽不够，空气漏入；
（2）抽汽冷凝器排水阻汽阀付线打开，空气漏入；
（3）抽汽器工作失常；
（4）凝结器冷却水量减少，水温升高，影响凝汽效果；
（5）冷凝液泵漏入空气，造成气化，打不起压力，凝汽器液面升高，淹没列管，减少冷却面积；
（6）注汽被氨污染，不凝气体积累。

第4题：

简述定量PCR的测定原理和方法。

正确答案:荧光标记技术是分子生物学最常用的标记技术，荧光染料或荧光标记物与扩增产物结合后，被激发的荧光强度和扩增产物成正比。而根据扩增原理，扩增是呈指数增长，因此在反应体系和反应条件完全一样下，样本含量应与扩增产物的对数成正比，故在一定的条件下荧光强度和样本含量成正比。

第5题：

何谓易错PCR技术？简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程

正确答案:指从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行PCR，使扩增得到的基因出现碱基配对错误，从而引起基因突变的技术过程。
过程：双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。

第6题：

简述容错PCR定义。

正确答案: 是指在利用Taq聚合酶进行目的基因的PCR扩增的同时引入碱基错配，导致目的基因随机突变的一种DNA体外进化技术。

第7题：

简述PCR及其临床应用。

正确答案:聚合酶链反应（PCR）：利用DNA聚合酶（如TagDNA聚合酶）等在体外条件下，催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物：单链DNA片段。过程：变性DNA双链-单链（93～98℃），退火引物与模板结合（37～65℃），延伸双链合成（70～75℃）。常见PCR技术的类型：原位PCR、逆转录PCR（RT-PCR）及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用：（1）在感染性疾病中的应用：对传染性疾病进行病原学确证诊断；对病原体进行基因分型和同源性比较；克隆病原体各种蛋白质的基因，用于蛋白表达，制备诊断试剂或疫苗；发现新病原体；克隆病原体各种基因，建立基因表达载体，用于基因治疗。（2）遗传性疾病的基因诊断：发现的遗传病有4000多种；产前诊断PCR-RFLP；PCR-ASO。（3）肿瘤的研究及诊断：癌基因与抑癌基因。（4）在法医学中的应用：个人认识；亲子鉴定。（5）其他应用：DNA克隆；引入点突变、缺失或插入；重组PCR；DNA测序；示差PCR。

第8题：

简述PCR的步骤。PCR是如何使得特异性DNA片段以几何级数倍增的？

正确答案: PCR分三步：
①双链模板DNA变性。双链解开成单链。
②退火。
即引物与单链DNA两端互补序列配对，形成DNA聚合反应中的模板与引物的关系。没有引物的帮助，所有的DNA聚合酶都无能力从头合成一条新链。
③链的延伸。
DNA聚合酶从引物3’-OH端开始进行聚合酶反应，直至完全产生两条互补的新链。
三个反应阶段结束后，又可以开始下一次的循环，引物链的延伸产物与原来的模板DNA经加热变性后，也作为模板DNA和另一个引物互补，在DNA聚合酶作用下又发生引物链的延伸反应。这样反复循环数十次，可使特异性DNA片段以几何级数倍增。

第9题：

简述易错PCR技术与常规PCR技术的异同点。

正确答案:易错PCR技术是从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应（PCR），使扩增得到的基因出现碱基配对错误，而引起基因突变的技术过程。
易错PCR技术与常规PCR技术有很多相同之处，都是用DNA聚合酶为催化剂，使用四种脱氧核苷三磷酸为底物，都要添加镁离子，其操作过程也相同，都经过双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸三个步骤。
（1）双链DNA的变性（解链）：将待扩增的模板DNA升温至85~95℃，使DNA双链之间的氢键断开，解离为单链DNA。
（2）引物与单链DNA退火结合：单链DNA在温度逐步降低至50~70℃时，会与其碱基互补的引物结合形成双链，引物是经过设计后人工合成的与模板DNA某一片段互补的寡核苷酸链，长度为15~30个碱基。
（3）引物延伸：引物结合后，将温度升高至70~75℃，在DNA聚合酶的作用下，以引物为起点，以四种脱氧核苷三磷酸为底物，以目标DNA链为模板，按照碱基配对原则，由5′-端向3′-端的方向延伸，而进行DNA复制。以上三个步骤反复进行，一般经过30次循环，即可使目的基因扩增几百万倍。
易错PCR技术与常规PCR技术的主要不同点在于反应条件有所不同。
（1）在易错PCR中镁离子浓度较高：常规PCR扩增时，镁离子浓度为0.5~2.5mmol/L，进行易错PCR时，在原有基础上提高镁离子的浓度，以稳定非互补的碱基对。
（2）在易错PCR中可以添加一定浓度的锰离子，以降低聚合酶对模板的特异性，而常规PCR不用添加锰离子。
（3）在易错PCR中四种底物（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）的浓度比改版，即采用浓度不平衡的各种底物，是DNA聚合酶在催化基因扩增时，碱基配对错误的出现频率增加，而容易引起基因突变。

第10题：

简述影响飞机起飞和降落的特殊天气。

正确答案: 影响飞机起降的恶劣天气主要有：
①地面大风：有地面大风时，往往产生轮流涡旋，影响飞行的稳定性，加大操纵难度；
②低空风切变：当飞机遇到风切变时，空速将发生变化，从而使升力发生变化，力的平衡遭到破坏，会发生改变航速和飞机姿态现象；
③低能见度：能见度的好坏直接影响飞行的起降，低云、降水、雾、风沙、浮尘、烟、霾等天气对机场产生视程障碍现象。

简述降落PCR。

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