何谓易错PCR技术？简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程

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第1题：

用于基因突变检测的技术是 ( )

A、荧光定量PCR技术

B、PCR-RFLP技术

C、PCR微卫星检测技术

D、原位杂交技术

E、cDNA表达芯片技术

参考答案：B

第2题：

什么是PCR技术？请简述其过程。

正确答案: PCR技术（聚合酶链式反应）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。
基本过程为：
①高温解链；
②退火；
③链延伸。

第3题：

关于聚合酶链反应(PCR)的叙述不正确的是( )。

A、PCR方法需要特定的引物

B、PCR技术是一种体外DNA扩增技术

C、PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内DNA的复制

D、PCR技术能够快速特异地扩增任何目的基因或DNA

E、PCR技术需要在恒温环境进行

参考答案：E

第4题：

简述易错PCR技术与常规PCR技术的异同点。

正确答案:易错PCR技术是从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应（PCR），使扩增得到的基因出现碱基配对错误，而引起基因突变的技术过程。
易错PCR技术与常规PCR技术有很多相同之处，都是用DNA聚合酶为催化剂，使用四种脱氧核苷三磷酸为底物，都要添加镁离子，其操作过程也相同，都经过双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸三个步骤。
（1）双链DNA的变性（解链）：将待扩增的模板DNA升温至85~95℃，使DNA双链之间的氢键断开，解离为单链DNA。
（2）引物与单链DNA退火结合：单链DNA在温度逐步降低至50~70℃时，会与其碱基互补的引物结合形成双链，引物是经过设计后人工合成的与模板DNA某一片段互补的寡核苷酸链，长度为15~30个碱基。
（3）引物延伸：引物结合后，将温度升高至70~75℃，在DNA聚合酶的作用下，以引物为起点，以四种脱氧核苷三磷酸为底物，以目标DNA链为模板，按照碱基配对原则，由5′-端向3′-端的方向延伸，而进行DNA复制。以上三个步骤反复进行，一般经过30次循环，即可使目的基因扩增几百万倍。
易错PCR技术与常规PCR技术的主要不同点在于反应条件有所不同。
（1）在易错PCR中镁离子浓度较高：常规PCR扩增时，镁离子浓度为0.5~2.5mmol/L，进行易错PCR时，在原有基础上提高镁离子的浓度，以稳定非互补的碱基对。
（2）在易错PCR中可以添加一定浓度的锰离子，以降低聚合酶对模板的特异性，而常规PCR不用添加锰离子。
（3）在易错PCR中四种底物（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）的浓度比改版，即采用浓度不平衡的各种底物，是DNA聚合酶在催化基因扩增时，碱基配对错误的出现频率增加，而容易引起基因突变。

第5题：

何谓荧光实时定量PCR（RQ-PCR）技术？

正确答案: 荧光实时定量PCR（real-timequantitativePCR，RQ-PCR）技术即在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实的反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信号，从而实时监测整个PCR反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

第6题：

能够进行细胞内定位的DNA扩增技术是()。

A、反向PCR技术

B、原位PCR技术

C、实时PCR技术

D、多重PCR技术

答案：B

第7题：

PCR是目前唯一能在体外进行基因扩增的技术。

正确答案:错误

第8题：

PCR技术是一种快速的特定DNA片段在体外扩增的技术。( )

此题为判断题(对，错)。

参考答案：√

第9题：

何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。

正确答案: P.CR是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术，其原理类似DNA的体内扩增。它包括：PCR包括三个基本过程：①变性（denaturation），即在较高温度（93℃～98℃）使双链模板DNA变性解链成单链DNA，以提供复制的模板；
②退火（annealing），即在较低温度（37℃～65℃）使加入的引物与待扩增DNA区域特异性地结合，以提供DNA复制起始的3′―OH；
③延伸（extension），即在适当的温度（70℃～75℃）下，DNA聚合酶从特异性结合到DNA模板上的引物3′-OH端开始，根据碱基互补配对原则，按照待扩增区域的核苷酸序列，进行DNA链的延伸，即合成新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期；每个周期合成的产物又可作为下一个周期的模板，如此循环往复，经过n轮循环后，靶DNA的拷贝数理论上呈2ⁿ增长。
影响PCR反应的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg²⁺离子，此外，pH、温度、循环次数也会影响PCR反应。

第10题：

酶体外定向进化过程中产生随机突变的策略有哪些？什么是易错PCR？

正确答案:策略：易错PCR，DNA改组，外显子改组，杂合酶，PCR体外随机引发重组，交错延伸，随机定向突变。易错PCR是在采用Taq酶进行PCR扩增目的基因时，通过调整反应条件，如提高Mg2+浓度，加入Mn2+，改变体系中四种dNTP的浓度等，然后选择或筛选需要的突变体。

何谓易错PCR技术？简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程

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