什么是单克隆抗体？简述制备步骤。

题目

什么是单克隆抗体？简述制备步骤。

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相似问题和答案

第1题：

请简述色漆的制备步骤。

正确答案: 第一步在研磨设备中分散颜料；第二步调稀（或兑稀），即分散过程完成后，加入树脂溶液或溶剂来降低色浆的稠度，使它能从研磨设备中尽可能地放干净；第三步调漆，即将色漆配方中所有物料在调漆桶中凋匀。

第2题：

简述光谱试样的制备步骤。

正确答案:用切割机将试样从2/3处截取，冷却后，用60-80目砂轮片在磨样机上磨制，磨下量不得小于15mm，研磨面顺纹路呈一个平面并无气孔、裂纹、夹杂、空壳，加铝量不得大于0.3%，表面无油迹，不沾水，分析前不得用手触摸磨光面的合格试样，交光谱操作人员分析。

第3题：

简述单克隆抗体的制备原理。

正确答案：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。

第4题：

简述单克隆抗体的制备过程及主要原理。针对某一抗原物质A设计一个研究方案，并制备相应的单克隆抗体。

正确答案: 原理：在体液免疫反应中，一个抗原分子上可能含有许多抗原决定簇（即表位），每个淋巴细胞都会产生针对一个抗原决定簇的特异性抗体，若能把此B细胞由脾脏中挑出来，单独培养成细胞株，则可得单一种类的抗体，只会对一种抗原决定簇反应，其专一性极高。大量培养此细胞株，即可有质量一定、纯度均一的抗体，此即为单克隆抗体。基本过程：先免疫动物，分离脾细胞，准备骨髓瘤细胞的准备，细胞融合，筛选与克隆融合细胞，最后大量制备单克隆抗体。
方案：免疫动物：将处理好的抗原多次注射到BALB/c小鼠体内，每隔2天注射一次，第3~5天进行试采血检验血清中的抗体，同时可用脾内注射培养基轻轻挤压使淋巴细胞逸出的方法采集淋巴细胞（大多为B细胞）。
B细胞富集：将抗原包被在培养板或其他基质上，然后与脾细胞结合，那些表面具有特异性抗体的B细胞与抗原结合使得B细胞黏附于培养板或基质上，轻轻洗涤除去不黏附的细胞，留下的细胞为具有特异性抗体的B细胞，骨髓癌细胞的准备：用BALB/c小鼠的653。
细胞融合：用PEG诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞间进行融合，操作在10min内完成；融合后马上以HAT培养，能活下来的大多为B细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。未融合的骨髓瘤及骨髓瘤细胞间相互融合的细胞在HAT中因DNA合成抑制而死亡。未融合的B细胞及B细胞相互融合的细胞在体外培养因无法增殖会渐渐死去。使用抗原结合法对杂交瘤细胞产生的抗体专一性进行筛选采用有限稀释法或软琼脂法对杂交瘤细胞进行细胞克隆化，获得来自单个细胞的克隆；并对单个细胞生长出的群落，再次以ELISA筛选专一性抗体，获得可产生特异性抗体的单克隆细胞株。用体内法大量制备单克隆抗体：可把筛选出来的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，诱导小鼠产生大量腹水，然后以针头收集所产生的腹水，通常每次可取得3～5mL左右。

第5题：

麦芽汁的制备工艺是什么？关键步骤是什么？

正确答案:麦汁制造是将固态麦芽、非发芽谷物、酒花用水调制加工成澄清透明的麦芽汁的过程。
麦汁制造过程包括：原料的粉碎、糖化，糖化醪的过滤，混合麦汁加酒花煮沸，麦汁处理—澄清、冷却、通氧等一系列物理学、化学、生物化学的加工过程。
关键步骤是原料的糖化过程。

第6题：

试述制备单克隆抗体的原理是什么？用到的动物细胞工程技术手段有哪几种？单克隆抗体的特点有哪些？

正确答案:单克隆抗体的原理：要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。
手段：（1）灌注悬浮培养：连续灌注新的培养基，同时连续排出旧的培养液了，使细胞在一个相对稳定的环境中生长和繁殖，可提高细胞密度10倍以上
（2）贴壁细胞培养：由于大部分动物细胞无细胞壁，进行细胞培养时必须附在固体或半固体表面上培养，在固体载体表面上生长，并扩成一单层，称为单层培养法
（3）固定化细胞培养：采用载体使整个细胞固定化
单克隆抗体的特点：
（1）单克隆抗体是针对单一抗原决定的化学结构完全相同的单一抗体，其特异性强，与其对应抗原的亲和力高度均一
（2）制备时无需将抗原纯化，适于由未纯化的抗原大量制备。
（3）杂种瘤细胞株可冷冻于液氮中长期保存，所以单克隆抗体可以重复稳定的制备，不会因批号的不同而产生差异，只要使用来自同样杂交瘤的单克隆抗体，就能够以同一标准比较各研究室的数据。

第7题：

运用动物细胞工程技术制备单克隆抗体的正确操作步骤是（） ①筛选杂交瘤细胞 ②制备特异性抗原 ③免疫动物 ④制备免疫的细胞和骨髓瘤细胞 ⑤能产生特定抗体的杂交瘤细胞 ⑥大量培养杂交瘤细胞 ⑦诱导细胞融合 ⑧单克隆抗体的大量制备

A、②④③⑦⑤①⑥⑧
B、②③④⑦①⑤⑥⑧
C、④③⑦②⑤①⑧⑥
D、③④⑦①⑤⑧⑥②

正确答案:B

第8题：

什么是单克隆抗体?简述制备过程。

参考答案：经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌单一抗原表位的特异性抗体，是单克隆抗体。
单抗的制作过程大体分为抗原的制备，动物的免疫，b细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，筛选杂交瘤细胞，筛选能产生某种特异性单抗的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的克隆化，体外大规模培养或动物腹腔培养特异性杂交瘤细胞克隆，单抗的纯化及鉴定。

第9题：

简述利用杂交瘤技术进行单克隆抗体大规模生产的技术步骤与要点。

正确答案: 1.亲本细胞的准备（致敏B淋巴细胞、骨髓瘤细胞的准备）
2.细胞融合形成杂交瘤细胞
3.杂交瘤细胞的筛选（采用HAT（含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤A.和胸腺嘧啶核苷（T））选择性培养基）
4.可分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞的筛选：对每个含有杂交瘤细胞集落的生长孔中的上清液进行抗体检测，筛选出能够稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交细胞。检测方法：放射免疫测定、酶联免疫技术测定等
5.杂交瘤细胞的克隆化培养：有限稀释法或软琼脂平板法66、最常用的杂交瘤细胞杂交瘤细胞克隆方法有那些？（有限稀释法或软琼脂平板法）

第10题：

什么是HAT培养基？单克隆抗体制备过程中利用HAT培养基选择杂交瘤细胞的原理是什么？

正确答案: HAT是含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养基。DNA合成途径有两种：从头合成和补救途径。免疫脾细胞没有培养特性，不能存活，瘤细胞从头途径被A阻断，自身是HPRT-或（TK-），补救途径被阻断，杂交瘤细胞可以通过融合的脾细胞弥补瘤细胞缺陷，从而在HAT培养基上存活。

什么是单克隆抗体？简述制备步骤。

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